冷凍保存是保存細胞的主要方法，對細胞的保種、引種、培養(yǎng)以及實驗研究等具有重要意義。在凍存細胞時，為使細胞免受冷凍損傷，常常加入冷凍保護劑，目前使用最為廣泛的是滲透型保護劑DMSO（二甲基亞砜），其保護機制是在細胞冷凍懸液完全凝固之前滲透到細胞內(nèi)，在細胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細胞內(nèi)外的未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護細胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷，同時細胞內(nèi)的水分也不會過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮。但DMSO在常溫下對細胞毒副作用較大，濃度較大時對細胞毒害作用較大，尤其是敏感的細胞，如雜交瘤細胞；一般情況下，DMSO使用終濃度在5%～15%時具有較好的效果。

武漢普諾賽生產(chǎn)的通用血清型程序凍存液，由DMSO、進口胎牛血清（FBS）和DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成，伴隨著普諾賽的發(fā)展，經(jīng)過數(shù)百種細胞的驗證，適用于各種哺乳動物原代細胞，傳代細胞系和雜交瘤細胞等細胞的凍存，細胞存活率高，儲存穩(wěn)定，使用方便。  

產(chǎn)品信息

使用說明

細胞凍存

1、選擇對數(shù)生長期的細胞（90%左右），并保證在收獲前24h內(nèi)換液一次，收集細胞，并將細胞制備成單細胞懸液（貼壁細胞可能需要用胰酶消化），計數(shù)；

2、將細胞懸液1000r/min離心5min，棄上清；

3、向細胞沉淀物中加入冷凍液，輕輕吹打，使細胞密度達到2~5x10⁶個/ml；

4、將上述細胞懸液按0.5ml-1.0ml的量，分裝于無菌細胞凍存小管內(nèi)，擰緊管蓋，并做好標記；

5、按細胞凍存程序性降溫步驟凍存細胞（2-8℃，40min；-20℃，30min-60min；-80℃，過夜；液氮保存）或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細胞復(fù)蘇

1、細胞復(fù)蘇時，液氮中取出凍存管后，直接于37℃水浴中完全解凍（勿使水浸沒凍存管口，而造成污染）；

2、從37℃水浴中取出凍存管，酒精消毒后，吸出細胞懸液于10倍體積的培養(yǎng)液中，1000r/min離心5min，棄上清；

3、加入含血清的培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)，調(diào)整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項

1、使用本產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染；

2、2-8℃中解凍，搖勻后使用，請勿反復(fù)凍融，用量較少時建議分裝凍存；

3、不宜長時間放置于室溫環(huán)境中，初次融化后可在2-8℃避光保存至少一個月；

4、使用時如有少量蛋白析出，可以直接使用，不會影響凍存效果，也可離心去沉淀后使用；

5、凍存后的細胞請勿在-80℃保存超過一個月，長期保存應(yīng)放置于液氮中；

6、凍存細胞時，請將細胞凍存管管蓋擰緊，以免液氮內(nèi)滲，而導(dǎo)致細胞復(fù)蘇時發(fā)生凍存管炸裂危險；

7、因本品中含有DMSO，使用時請做好防護措施，避免與皮膚直接接觸；

8、本產(chǎn)品僅用于科研或進一步研究使用，不用于診斷和治療。