由普諾賽技術(shù)團隊精心優(yōu)化的人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基（含血替），經(jīng)篩選配比的無血清添加物及其他輔助 成分。該產(chǎn)品適用于人間質(zhì)干細胞無血清條件的培養(yǎng)；可維持人間質(zhì)干細胞良好的增殖速率，并保持良好的分化能力。

人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基（含血替）是專為人類間充質(zhì)干細胞（包括臍帶間充質(zhì)、骨髓間充質(zhì)、脂肪間充質(zhì)等干細胞）設(shè)計的無血清培養(yǎng)基。在干細胞分離過程中，當(dāng)細胞貼壁率達到75-85%后，可使用此培養(yǎng)基進行傳代。與傳統(tǒng)的添加動物血清的培養(yǎng)基相比，人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基（含血替）維持間充質(zhì)干細胞的無分化生長，保持細胞的形態(tài)特征和正常的傳代次數(shù)等，保證間充質(zhì)干細胞的高增殖率以及分化潛能。

產(chǎn)品信息

人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基（含血替）的主要組成成分：氨基酸，維生素、無機鹽、 白蛋白、血清替代物、微量元素等。

產(chǎn)品使用說明

1、人間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基（含血替）準(zhǔn)備

將CM-SC02無血清培養(yǎng)基添加劑在2-8℃過夜融化，按1:50比例加入CM-SC02無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即得到人間充質(zhì)干細胞無血清（含血替）的完全培養(yǎng)基。

溫馨提示：配好的人間充質(zhì)干細胞無血清（含血替）的完全培養(yǎng)基在2-8℃避光條件下，可保存30天。若小量、多次使用，建議您將CM-SC02無血清培養(yǎng)基添加劑分裝后，保存于-5~-20℃冰箱，可避免培養(yǎng)基不必要的浪費。

2、人間充質(zhì)干細胞復(fù)蘇（以T-75瓶為例）

① 從冰箱中取出完全培養(yǎng)基，在生物安全柜或超凈臺中吸取適量（如T-75瓶：10-15 mL）完全培養(yǎng)基沿上表面加入間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)瓶中，切勿沖到細胞培養(yǎng)瓶底面，即：細胞生長面。然后慢慢將細胞培養(yǎng)瓶平放，在37℃、恒溫CO2培養(yǎng)箱中放置5-10分鐘后使用。

溫馨提示：請嚴(yán)格按照此步驟操作，否則可能會出現(xiàn)細胞培養(yǎng)瓶中細胞生長空白區(qū)域，即所謂的“生長空洞”。多數(shù)用戶使用的不是專用的預(yù)包被細胞培養(yǎng)瓶，而是普通的細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿，其表面環(huán)境并不利于無血清培養(yǎng)環(huán)境下的間充質(zhì)干細胞貼壁。37℃放置5-10分鐘，可讓培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與細胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合，使得間充質(zhì)干細胞的貼壁能力增強，降低“生長空洞”出現(xiàn)的概率。

② 從液氮中取出凍存的間充質(zhì)干細胞，迅速將凍存管放入37℃水浴中，快速融解。

溫馨提示：盡可能避免水沒過管帽，以減少污染的風(fēng)險；要快速完成細胞復(fù)蘇過程（盡量控制在1分鐘內(nèi)），融化過程時間過長，會造成復(fù)蘇后細胞活性較差。

③ 用70-75%酒精消毒凍存管外壁，在生物安全柜或超凈臺中打開凍存管，用吸管/移液器將細胞凍存懸液緩慢移入裝有5-10 mL細胞完全培養(yǎng)基的15 mL離心管中（在這一過程請盡可能避免產(chǎn)生氣泡）。

溫馨提示：為了減少細胞損失，往細胞凍存管中加入1 mL完全培養(yǎng)基，稍微吹打，用吸管/移液器將這1 mL的細胞懸液吸入離心管中，再用吸管/移液器將離心管中的細胞輕輕吹打混勻。

④ 1200 rpm離心5 min，棄上清，加入2 mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，臺盼藍染色計數(shù)，按密度2×104 cells/cm²將細胞接種至步驟①中孵育完的細胞培養(yǎng)瓶中，添加細胞時，將細胞培養(yǎng)瓶豎立，細胞懸液直接加到底部，切忌沖到細胞培養(yǎng)瓶底面。

⑤ 輕輕搖晃細胞培養(yǎng)器皿，使細胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

⑥ 24 h后，更換新鮮的完全培養(yǎng)基（溫育至37℃）。

3、人間充質(zhì)干細胞傳代（以T-75瓶為例）

① 在顯微鏡下觀察細胞，當(dāng)細胞融合度達到80-90%，即可傳代。

  溫馨提示：細胞融合度請勿超過90%。很多傳代后的細胞大比例死亡，是由于傳代前細胞生長過密（融合度過高），導(dǎo)致細胞消化異常（細胞整片或成片脫落），加之隨后的不當(dāng)操作（如用移液器反復(fù)吹打成片細胞使其成為單個細胞），此機械損失過程會嚴(yán)重損害細胞膜，引發(fā)大比例的細胞死亡；間充質(zhì)干細胞經(jīng)凍存后再次使用時，尤為明顯。

② 預(yù)處理細胞培養(yǎng)瓶，處理方法同細胞復(fù)蘇中的步驟①。

③ 在生物安全柜或超凈臺中，棄去細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，加入5-10 mLPBS清洗細胞后棄去，再加入2 mL0.05%胰酶-EDTA消化細胞。

④ 在顯微鏡下觀察到細胞變圓時，立即加入5 mL胰酶抑制劑終止消化。

⑤ 用移液器輕輕吹打瓶壁上還未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散。

⑥ 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中，1200 rpm離心5 min。棄上清，加入2 mL細胞完全培養(yǎng)基重懸細胞，臺盼藍染色計數(shù)，按細胞密度2×104cells/cm²，將細胞接種至細胞傳代②步驟中孵育完的細胞培養(yǎng)瓶中，添加細胞時，將細胞培養(yǎng)瓶豎立，細胞懸液直接加到底部，切忌沖到細胞培養(yǎng)瓶底面。

⑦ 輕輕搖晃細胞培養(yǎng)器皿，使細胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO₂、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

4、人間充質(zhì)干細胞凍存

① 用0.05%胰酶-EDTA消化待凍存的細胞，加入胰酶抑制劑終止消化并離心，重懸后進行細胞計數(shù)。

② 1200 rpm離心5 min，棄上清。

③ 根據(jù)細胞計數(shù)情況，緩慢加入適量冷的無血清凍存液（無血清凍存液可即拿即用或置于冰袋備用），調(diào)整細胞密度在1×10⁶ cells/mL左右。

④ 輕輕地重懸細胞，將重懸均勻的細胞按等份加入到滅菌的凍存管中（需提前做好標(biāo)記），旋緊凍存管蓋。

⑤ 迅速將凍存管放入程序降溫盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃冰箱。

⑥ 過夜放置后，將細胞從-80℃冰箱轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。

注意事項

1. 使用本產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染；

2. 配制成完全培養(yǎng)基后，避光保存在2-8℃可存放3-4周；

3. 為了更好的使用效果，請勿對試劑進行反復(fù)凍融；

4.本產(chǎn)品僅用于科研或進一步研究使用，不用于診斷和治療。

CM-SC02.pdf