產(chǎn)品信息

適用細胞系

HEK293無血清補料（A&B）由普諾賽研發(fā)團隊自主研發(fā)和生產(chǎn)。該流加培養(yǎng)基適用于不同亞型的人胚胎腎細胞293（Human Embryonic Kidney 293 Cells, HEK293）的流加培養(yǎng)工藝，以實現(xiàn)腺病毒大量擴增以及產(chǎn)物穩(wěn)定表達。

培養(yǎng)基特性

1. HEK293無血清補料A和補料B均為補料培養(yǎng)基，不含任何動物源性成分（Animal-Derived Component- Free, ADCF）。

2. 補料A含有氨基酸、維生素、葡萄糖、水解物、無機鹽和微量元素；補料B為氨基酸混合物。兩個補料培養(yǎng)基均不含生長因子、多肽和酚紅。

3. 補料A含有P188和HT，不含L-谷氨酰胺。

4. 補料B不含P188、HT和L-谷氨酰胺。

瞬轉(zhuǎn)補料策略（推薦）

補料液添加量（V/V）：補料A 10%、補料B 1%

轉(zhuǎn)染前一天按照1.5×10⁶ cells/mL密度接種，第二天當(dāng)密度長到3-4×10⁶ cells/mL左右，活率在97%以上進行轉(zhuǎn)染：

1. 分別稀釋質(zhì)粒與PEI，質(zhì)粒與PEI用量根據(jù)實際工藝調(diào)整；

(1) 計算好質(zhì)粒取用量，用Transbuffer稀釋至1.5 mL，混勻后室溫靜置5 min；

(2) 取相應(yīng)量的PEI用量，用Transbuffer稀釋至1.5 mL，混勻后室溫靜置5 min；

(3) 將稀釋的PEI緩慢地加入稀釋的質(zhì)粒中，輕柔緩慢混勻，室溫靜置10 min孵育(或根據(jù)實際工藝調(diào)整孵育時間)。

2. 將孵育后的3 mL混勻液加入轉(zhuǎn)染搖瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，此時工作體積為30 mL；此時記為D0;

3. 轉(zhuǎn)染后18-24 h按照補料A 10%、補料B 1%補料一次。

4. 后續(xù)培養(yǎng)過程中只需補充充足的葡萄糖即可（低于4 g/L補至6-8 g/L），無需再補料。

5. 每天取樣測定細胞密度、活率、殘?zhí)?、乳酸等培養(yǎng)參數(shù)，D7收獲測定產(chǎn)量。

（注：具體培養(yǎng)工藝可根據(jù)實際項目需求自行調(diào)整）

穩(wěn)轉(zhuǎn)株補料策略（推薦）

1.降溫策略：HEK293穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞一般不降溫。

2.補料策略：

  補料液添加量（V/V）：補料A 3%、補料B 0.3%

(1) D7-D13補料量基于滲透壓確定，收獲點滲透壓根據(jù)歷史耐受數(shù)據(jù)，控制在合適范圍，收獲時滲透壓最高一般在400-600 mOsmol/kg；

(2) 初次測試實驗補料過程中根據(jù)滲透壓可探索合適補料量，建議D3開始每天測滲透壓，至少D2、D5、D7、D9、D11檢測滲透壓；

(3) D7前建議補料當(dāng)天補料前滲透壓在300-320 mOsmol/kg，D7-D10建議補料當(dāng)天補料前滲透壓在330-350 smol/kg；

(4) D10后滲透壓過高，則需要降低補料量，根據(jù)細胞實際耐受滲透壓情況及代謝情況調(diào)整補料。

3.補糖策略：低于4 g/L補到6-8 g/L。

4.含糖濃度：補料A含糖量77 g/L。

5.乳酸控制策略：后期如果乳酸濃度升高，建議通過降低補料量進行調(diào)整。

（注：具體培養(yǎng)工藝可根據(jù)實際項目需求自行調(diào)整）

 保存條件

 2-8℃，避光保存，有效期12個月。

SF1003 HEK293無血清補料.pdf