Annexin V是常用的檢測細(xì)胞凋亡的方法，一般通過流式細(xì)胞儀來檢測。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，方便后續(xù)數(shù)據(jù)分析，通常需要設(shè)置不同對照實(shí)驗(yàn)組。

①樣本不帶自發(fā)熒光：

②樣本帶自發(fā)熒光

空白對照：調(diào)節(jié)閾值和儀器電壓。

生物學(xué)對照：排除實(shí)驗(yàn)操作對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，扣除熒光背景，同時還可以作為實(shí)驗(yàn)組劃門的依據(jù)。

單陽對照：調(diào)節(jié)補(bǔ)償，同時也可以輔助調(diào)節(jié)該通道的電壓，防止信號超出儀器接受范圍。

注意事項：

*單陽對照組細(xì)胞一定要用明顯有凋亡的細(xì)胞，因?yàn)檎{(diào)節(jié)補(bǔ)償需要有足夠的陽性信號

*樣本帶自發(fā)熒光需要設(shè)置三管單陽對照，確保每一管都只有一種熒光

實(shí)驗(yàn)組：檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Tips：

樣本為貼壁細(xì)胞：

*細(xì)胞培養(yǎng)基中漂浮的細(xì)胞需要收集，與后續(xù)收集的貼壁細(xì)胞一起檢測

*避免人為操作帶來的細(xì)胞損傷，如：胰酶消化時間要適宜，消化貼壁細(xì)胞時操作要輕柔等

*盡量不使用含EDTA的胰酶，因?yàn)?/span>EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。如果一定要用含EDTA的胰酶，終止消化后要將細(xì)胞洗滌干凈，盡量去除EDTA

*細(xì)胞比較難消化時可以分批次進(jìn)行消化，避免先消化下來的細(xì)胞被過度消化導(dǎo)致假陽性結(jié)果