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細胞學堂 | 人軟骨細胞傳代后變形原因揭秘
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時間：2022-06-08 09:15:16
軟骨組織由軟骨細胞、基質及纖維構成，人軟骨細胞就分離自軟骨組織。軟骨細胞位于軟骨陷窩內。
電鏡下，軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。
體外培養(yǎng)的軟骨細胞，對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具有重要意義。
基礎信息
培養(yǎng)基：含F(xiàn)BS、生長添加劑、雙抗等
換液頻率：每2~3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳5代左右，3代以內狀態(tài)最佳
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
軟骨細胞傳代后變形，可能是大多數(shù)老師在培養(yǎng)過程中都會遇到的問題。不過，傳代時形態(tài)發(fā)生變化，這是正?，F(xiàn)象。下面詳解該細胞形態(tài)的變化過程：
第1代的細胞形態(tài)
第1代人軟骨細胞，細胞形態(tài)呈梭形、多角形（如圖1）。
圖1. 第1代人軟骨細胞狀態(tài)圖（圖片來源于客戶，僅供參考）
第2代的細胞形態(tài)
傳了1代后，細胞形態(tài)開始發(fā)生改變，細胞伸出絲狀偽足，形態(tài)似成纖維細胞（如圖2)。
圖2. 第2代人軟骨細胞狀態(tài)圖（圖片來源于客戶，僅供參考）
從第1代到第2代，細胞就發(fā)生了形態(tài)上的改變。那么，繼續(xù)傳代下去，細胞形態(tài)是否會繼續(xù)發(fā)生改變呢？
答案是肯定的。第3代的軟骨細胞形態(tài)成纖維化會更為明顯，細胞形態(tài)出現(xiàn)長梭形，并且生長速度開始下降。4代后較為明顯，到第6代細胞形態(tài)幾乎全部變?yōu)殚L梭形，似成纖維細胞樣。所以，建議最好選擇2代或3代的軟骨細胞進行實驗。
既然人軟骨細胞傳代時，形態(tài)會發(fā)生變化，那究竟是什么原因造成的呢？
在體外培養(yǎng)人軟骨細胞時，軟骨細胞呈貼壁生長，原代細胞大多呈橢圓形和多角形。隨著傳代次數(shù)增加，細胞逐漸變成長梭形，向纖維樣細胞轉化。同時，該細胞的功能也會發(fā)生變化：軟骨標志性蛋白Ⅱ膠原合成分泌減少，而Ⅰ、Ⅲ型膠原合成分泌增多。
Ⅱ膠原的合成和分泌，是軟骨細胞維持其分化表型的特征性指標，其在透明軟骨中占膠原的85%~90%，提供了軟骨特有的張力和硬度。
其次，軟骨中的其他分子與膠原蛋白結合，會形成網狀結構，使軟骨具有一定的彈性，同時對于維持軟骨形狀，承載外來負荷起著非常重要的作用。所以，隨著傳代次數(shù)的增加，維持細胞形態(tài)的物質會逐漸減少，細胞的形態(tài)就會發(fā)生改變。
這種形態(tài)和功能的變化稱之為反分化現(xiàn)象，也是單層傳代細胞的普遍現(xiàn)象。
培養(yǎng)小貼士：
1. 低密度培養(yǎng)的軟骨細胞易發(fā)生去分化現(xiàn)象，一般最適接種密度為2~10×104/cm2;
2. 軟骨細胞代謝較為緩慢，換液頻度的增加無益于細胞的增殖，反而可能破壞由細胞分泌而形成的群體化學環(huán)境。
●參考文獻●
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