本視頻為普諾賽貼壁細胞傳代培養(yǎng)操作指南，對每一步操作都做了演示，以便實驗者更好地理解貼壁細胞傳代實驗過程。

貼壁細胞傳代實驗準備：

將15 mL離心管、T25細胞培養(yǎng)瓶、PBS緩沖液、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30 min消毒滅菌；
細胞完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶-0.02%EDTA從4℃冰箱中取出后，復(fù)溫至室溫，備用。

貼壁細胞傳代實驗步驟：
1. 將準備好的培養(yǎng)基等物品用酒精消毒后放入安全柜中；
2. 從培養(yǎng)箱中取出待處理的細胞，在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)；
3. 用酒精消毒培養(yǎng)瓶，放入安全柜中；
4. 輕輕吸去細胞上清；
5. 加入2-3 mL PBS緩沖液潤洗一次，吸去上清；

6. 加入1 mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA，輕輕晃勻、覆蓋所有細胞后，置于37℃培養(yǎng)箱靜置消化；
7. 消化1-2 min左右，在顯微鏡下觀察細胞消化情況，每個細胞消化時間有所不同，具體以細胞消化狀態(tài)為準；     

8. 消化完全后，加3 mL完全培養(yǎng)基終止，1200 rpm，3 min離心，去上清；
9. 加入新鮮完全培養(yǎng)基重懸，按比例將細胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中；

10. 在顯微鏡下觀察傳代后的細胞密度及狀態(tài)；                 
11. 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項：
1）培養(yǎng)過程中需維持細胞處于對數(shù)生長期，80%左右即可傳代，傳代比例請參照說明書建議；
2）消化時間不宜過長，大部分細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可中止消化，難消化的細胞可分次消化，每次時間不超過5 min；
3）培養(yǎng)過程中需要定期換液，一般細胞建議2-3天換液一次。