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細胞學(xué)堂 | L-929細胞培養(yǎng)秘籍：新手也能輕松搞定！

來源：Pricella　　瀏覽量：　　發(fā)布時間：2025-02-28 14:00:00

L-929 細胞作為最早成功建立并得以廣泛應(yīng)用的永生化細胞系之一，在細胞生物學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)和毒理學(xué)等多個領(lǐng)域具有重要的研究價值。

本期細胞學(xué)堂將為大家詳細介紹L-929細胞的基本信息、培養(yǎng)過程中的注意事項，以及在巨噬細胞研究中的應(yīng)用，幫助您快速掌握培養(yǎng)細胞技巧，順利開展實驗。

01#

細胞背景

L-929細胞的全稱是NCTC clone 929，源自1948年，由WR. Earle等人從一只100天大的雄性C3H/An小鼠的皮下結(jié)締組織分離出成纖維細胞并建立^[1]。在其名稱中，“L“代表該細胞組織來源于疏松結(jié)締組織（Loose Connective Tissue），“929”則是其建系時的編號。

L-929細胞的使用歷史悠久，在研究過程中衍生出了一系列的細胞，最常用的包括L-M[TK-]細胞、A9細胞、L Wnt-3A細胞以及L-WRN細胞等。

02#

細胞基本信息

別稱：NCTC-929L; L cell; Strain L-929; L929(NCTC); Clone 929; Earle's L cells等

生長特性：成纖維細胞樣，貼壁生長

倍增時間：28-36 h

培養(yǎng)條件：

MEM（含NEAA）+10% FBS+1% P/S

氣相：空氣，95% ；CO₂，5%

溫度：37℃

換液頻率：2-3次/周

傳代比例：1:3-1:4

03#

培養(yǎng)注意事項

L-929細胞通常用10%的胎牛血清培養(yǎng)，但實際上，使用10%的馬血清也能滿足其正常生長需求。在這兩種血清的培養(yǎng)條件下，L-929細胞在形態(tài)和生長速度上未表現(xiàn)出明顯差異。

L-929細胞具有很好的適應(yīng)性，能夠在不同類型的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如常見的DMEM、MEM以及RPMI-1640等）中生長。但需要注意的是，替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基時需要經(jīng)過一定的適應(yīng)和馴化階段，以確保細胞能正常生長。

L-929細胞對于血清非常敏感。當(dāng)血清質(zhì)量不佳時，細胞形態(tài)和生長狀態(tài)可能發(fā)生變化，例如變?yōu)閳A形（如圖1），或增殖速度變慢，甚至停滯。

圖1. L-929細胞正常生長形態(tài)和因血清質(zhì)量差導(dǎo)致細胞變圓

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在巨噬細胞研究中的應(yīng)用

L-929細胞不僅在基礎(chǔ)細胞生物學(xué)中有廣泛應(yīng)用，還在免疫學(xué)和炎癥研究中發(fā)揮著重要作用。L-929細胞具備分泌巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）的能力，這一因子是誘導(dǎo)骨髓單核細胞分化為成熟巨噬細胞的關(guān)鍵因子。此外，L-929細胞還可分泌多種細胞因子，如MIF、CCL2、CCL7等，協(xié)同促進巨噬細胞的分化和成熟^[2]。使用L-929細胞條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的巨噬細胞，生物學(xué)特性通常優(yōu)于直接提取的成熟巨噬細胞^[3]，因此被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)和炎癥研究中。

L-929細胞條件培養(yǎng)基制備方法

將L-929細胞接種于T75培養(yǎng)瓶，使用L-929細胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)7-10天；

收集培養(yǎng)上清液，通過高速離心或過濾去除細胞碎片；

將上清液分裝，存儲于-20℃或-80℃冷凍保存；

使用時，按照20-30%的比例添加至含10%血清的完全培養(yǎng)基中。

L-929細胞在細胞生物學(xué)和免疫學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用，使其成為研究者不可或缺的工具。在培養(yǎng)過程中，確保細胞培養(yǎng)條件的適宜性以及血清質(zhì)量的穩(wěn)定性，能夠有效保證細胞的健康生長。此外，L-929細胞在巨噬細胞研究中的應(yīng)用，為免疫學(xué)實驗提供了有力支持。為幫助大家更好地開展相關(guān)實驗，普諾賽提供了L-929細胞及其專用培養(yǎng)基，一站式培養(yǎng)細胞，助您科研無憂！

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參考文獻

[1]

Katherine K. Sanford, Wilton R. Earle, Gwendolyn D. Likely. The Growth in Vitro of Single Isolated Tissue Cells. Journal of the National Cancer Institute, 1948 Dec; 9 (3):229-246.

[2]

Heap RE, Marín-Rubio JL, Peltier J, et al. Proteomics characterisation of the L929 cell supernatant and its role in BMDM differentiation [J]. Life Science Alliance, 2021 Apr 14; 4(6):e202000957.

[3]

Wang W, Qin Y, Wang YR, et al. Characteristic comparison of mouse primary macrophages cultured in L929 cell conditioned medium [J]. Chinese Journal of Biotechnology, 2020, 36(7): 1431-1439.