細(xì)胞學(xué)堂 | BV2細(xì)胞形態(tài)大變樣，如何“力挽狂瀾”？
BV2 是常用的小膠質(zhì)細(xì)胞模型，它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒（J2）感染原代小膠質(zhì)細(xì)胞而獲得永生化。BV2細(xì)胞表達(dá)非特異性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏過氧化物酶活性。這種細(xì)胞不僅會分泌溶菌酶，在適當(dāng)?shù)拇碳は?，還會分泌白細(xì)胞介素1和腫瘤壞死因子。
此外，BV2細(xì)胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性，用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。
從表型上看，BV2細(xì)胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性，而對MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈陰性[1]。
圖A. BV2細(xì)胞顯微照片，bar=30 μm.
圖B. 通過掃描電鏡觀察，在玻璃蓋板上培養(yǎng)的BV2細(xì)胞，bar=5 μm.
圖C. 通過透射電鏡觀察，BV2細(xì)胞的部分細(xì)胞質(zhì)吞噬iCA，bar=3 μm.
（圖片引用自文獻(xiàn)[1]）
在培養(yǎng)BV2細(xì)胞的時候，同學(xué)們最常遇到的問題就是生長形態(tài)異常。生長形態(tài)異常往往伴隨著細(xì)胞生長緩慢、細(xì)胞死亡等，導(dǎo)致實驗做不出結(jié)果，給大家?guī)碇刂乩_。
普諾賽根據(jù)多年的實驗經(jīng)驗，為大家整理了這一現(xiàn)象可能發(fā)生的原因，及相應(yīng)解決方案。
首先我們來看看正常的BV2形態(tài)。結(jié)合眾多文獻(xiàn)和Procell的細(xì)胞圖片來看，BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，它的形態(tài)并不規(guī)則，存在圓形和梭形兩種。
懸浮細(xì)胞為圓形，貼壁細(xì)胞既有圓形也有梭形。由于圓形細(xì)胞折光率高，它的邊緣看起來是發(fā)亮的；梭形細(xì)胞則向兩端伸出黑色突起。
（圖片源自Procell）
那么，異常生長的BV2細(xì)胞有哪些形態(tài)呢？
如何根據(jù)不同的異常生長形態(tài)，調(diào)整改善培養(yǎng)條件，及時解決問題？
普諾賽總結(jié)如下：
形態(tài)1：細(xì)胞全部飄起，完全不貼壁
解析：分為培養(yǎng)基偏堿及復(fù)蘇后不貼壁兩種情況。
（1）培養(yǎng)基偏堿。培養(yǎng)瓶不透氣或者開封時間過長，培養(yǎng)基PH將增大，可見培養(yǎng)基呈紫紅色。BV2對培養(yǎng)基酸堿度較為敏感，在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時后將會全部飄起。
解決方案：給細(xì)胞換上新鮮配制的培養(yǎng)基，并使用透氣瓶。
（2）復(fù)蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復(fù)蘇操作過程，以及培養(yǎng)基是否存在問題。
解決方案：確保凍存前狀態(tài)良好及凍存復(fù)蘇操作規(guī)范，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，即可解決問題。
形態(tài)2：細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榘⒚装蜆?/strong>
解析：小膠質(zhì)細(xì)胞是一種可塑性極高的細(xì)胞，可通過特定因素激活，從而發(fā)揮其免疫功能。從靜息態(tài)變?yōu)榧せ顟B(tài)的過程中，小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)也隨之發(fā)生改變。
實驗中常用細(xì)菌脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFNγ），分別模擬細(xì)菌和病毒感染，來刺激小膠質(zhì)細(xì)胞激活。受到刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣（如下圖所示）。
但有的時候BV2形態(tài)變化并不明顯，還需要結(jié)合其他實驗，如檢測NO、IL-13等炎癥因子的表達(dá)，來確定BV2是否被定向激活。
（圖片引用自文獻(xiàn)[2]）
如果細(xì)胞沒有受到任何刺激，就已經(jīng)呈現(xiàn)阿米巴樣，或者受刺激后，炎癥因子表達(dá)沒有差異，那么細(xì)胞有可能發(fā)生了自分化。
其原因可以從以下幾點考慮：
（1）存在潛在微生物污染，刺激細(xì)胞自分化。
解決方案：通過去掉培養(yǎng)基中的抗生素確定污染類型，并排查污染源頭。
（2）使用的胎牛血清內(nèi)毒素高，內(nèi)毒素刺激細(xì)胞自分化。
解決方案：嘗試使用其他胎牛血清品牌，或許能得到改善。
形態(tài)3：全都是分枝狀細(xì)胞，圓形細(xì)胞少
解析：這種形態(tài)往往伴隨著細(xì)胞生長慢或生長停滯的情況。由于圓形細(xì)胞增殖速度較快，在圓形細(xì)胞缺失的狀況下，整體增殖速度就會減慢。
解決方案：由于BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，貼壁和懸浮細(xì)胞的比例并不固定，當(dāng)懸浮細(xì)胞較多時，換液和傳代時要將懸浮細(xì)胞收集，避免圓形細(xì)胞的大量損失。
總而言之，BV2細(xì)胞的形態(tài)、生長狀態(tài)與其生長環(huán)境息息相關(guān)，給細(xì)胞以最合適的環(huán)境，嚴(yán)格按照要求規(guī)范操作，細(xì)胞也將用最好的狀態(tài)回報你。
參考文獻(xiàn)：
[1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.
Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.
Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.
J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)
[2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.
Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.
Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells.
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