細(xì)胞學(xué)堂 | 骨髓來源樹突狀細(xì)胞（DC細(xì)胞）怎么養(yǎng)

樹突狀細(xì)胞(dendriticcells, DC)，因其表面具有偽足樣或樹枝狀突起而得名,它是體內(nèi)最廣泛的專職抗原遞呈細(xì)胞( antigen presenting cells,APC) , 具有強(qiáng)大的激活初始T細(xì)胞, 激發(fā)初次免疫應(yīng)答的獨(dú)特功效。

DC細(xì)胞在體內(nèi)含量甚微, 這極大地限制了DC的研究和應(yīng)用。但DC能從不同組織里的DC前體細(xì)胞分化、誘導(dǎo)而來, 如骨髓、外周血、臍血中培養(yǎng)出來。

DC不僅能誘導(dǎo)免疫反應(yīng), 還具有誘導(dǎo)免疫耐受的特性。根據(jù)發(fā)育成熟狀態(tài)，將DC分為未成熟DC (immatureDC, im-DC)、成熟DC (matureDC, mDC)和半成熟DC(semi-matureDC, smDC) 。DC表達(dá)特異性表面標(biāo)志OX62, 高表達(dá)MHCII、CD80、CD86。成熟的DC具有明顯刺激同種異體T細(xì)胞增殖的能力。 

本文所述內(nèi)容，適用于小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)和大鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)。

提取方法

取大腿，沖洗骨髓，得到骨髓細(xì)胞懸液, 經(jīng)密度梯度離心得到骨髓單個核細(xì)胞。

誘導(dǎo)方法

應(yīng)用重組粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、重組白細(xì)胞介素-4 (IL-4)誘導(dǎo)，可以得到未成熟的DC細(xì)胞， 再加入重組腫瘤壞死因子-α(TNF-α) 進(jìn)行體外誘導(dǎo)培養(yǎng)，可以得到成熟的DC細(xì)胞。

標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)

成熟的DC細(xì)胞形態(tài)多樣。細(xì)胞表面伸出樹枝樣突起, 形態(tài)不規(guī)則,長短及粗細(xì)不一, 細(xì)胞形態(tài)有的呈葉狀, 有的呈星狀, 細(xì)胞大而透亮。

小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)（100X）

小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)（200X）

培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

DC的培養(yǎng)時間較長, DC逐漸由貼壁生長變成半懸浮, 懸浮狀態(tài)生長。當(dāng)DC開始半懸浮及懸浮生長后, 換液時吸走的培養(yǎng)液中會帶走一定量的DC, 可將其離心后，再置于培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng), 避免DC的損失浪費(fèi)。

DC細(xì)胞為不增殖細(xì)胞群，建議收貨一周內(nèi)做實(shí)驗(yàn)為最佳。

收貨處理方法

收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

1、取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身；

2、拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、將T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基吸出轉(zhuǎn)移至50ml離心管中，經(jīng)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；

4、用新鮮培養(yǎng)基輕輕吹打混勻細(xì)胞沉淀，轉(zhuǎn)入原瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，procell寄送的培養(yǎng)瓶使用的是不透氣瓶蓋，需要擰松瓶蓋讓細(xì)胞透氣。

5、DC細(xì)胞為不增殖細(xì)胞群，如果您的實(shí)驗(yàn)還未準(zhǔn)備好，建議您每3天換液一次即可，換液時注意將舊培養(yǎng)基離心收集細(xì)胞后放回原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

6、普諾賽建議您收貨后一周內(nèi)做實(shí)驗(yàn)，避免細(xì)胞培養(yǎng)時間過長影響狀態(tài)以及后續(xù)試驗(yàn)結(jié)果。

半貼壁半懸浮細(xì)胞消化處理方法

如您的細(xì)胞在做實(shí)驗(yàn)前需要消化后轉(zhuǎn)移到孔板或者其他器皿，可按照如下操作進(jìn)行：

1、吸出舊培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中，用PBS沖洗2遍，將沖洗的PBS也轉(zhuǎn)入離心管中一起離心，經(jīng)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀①；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化； 

3、用吸管輕輕吹打混勻，收集細(xì)胞懸液至離心管中；經(jīng)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀②； 

4、吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞沉淀①、細(xì)胞沉淀②，把①、②混勻；

5、用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，按實(shí)驗(yàn)需求接種于實(shí)驗(yàn)器皿內(nèi)（按實(shí)驗(yàn)需求），然后補(bǔ)充適量新鮮的完全培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

6、待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實(shí)驗(yàn)；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。

7、普諾賽建議您收貨后一周內(nèi)做實(shí)驗(yàn)，避免細(xì)胞培養(yǎng)時間過長影響狀態(tài)以及后續(xù)試驗(yàn)結(jié)果。

溫馨提醒：

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