細(xì)胞學(xué)堂 | RPMI8226培養(yǎng)易被忽視的問題

RPMI8226是1966年從一名61歲男性漿細(xì)胞瘤患者的外周血中分離出的B淋巴細(xì)胞，它們可用于免疫學(xué)和免疫系統(tǒng)疾病的研究。該細(xì)胞系是合適的轉(zhuǎn)染宿主。

基礎(chǔ)信息

形態(tài)特征

與其他由外周血白細(xì)胞發(fā)展而來的細(xì)胞系相似，該細(xì)胞亦表現(xiàn)出淋巴母細(xì)胞形態(tài)特征。該細(xì)胞系未見典型的成熟漿細(xì)胞，但有未成熟漿細(xì)胞，胞漿染色較深。掃描電鏡照片顯示，幾乎所有細(xì)胞內(nèi)部都有一層圍繞細(xì)胞排列的腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。這在其他細(xì)胞系中未曾出現(xiàn)，這些結(jié)構(gòu)特征類似于發(fā)展中的漿細(xì)胞。該細(xì)胞培養(yǎng)物中未發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞病毒。

基因表達(dá)

該細(xì)胞僅表達(dá)游離形式的人類免疫球蛋白λ型輕鏈。

特點(diǎn)

目前，學(xué)界暫沒有證據(jù)表明，RPMI8226細(xì)胞能產(chǎn)生重鏈(細(xì)胞質(zhì)型或分泌型)。

病毒易感性

人脊髓灰質(zhì)炎病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒、水泡性口炎病毒等，都是RPMI8226細(xì)胞容易感染的。

細(xì)胞培養(yǎng)

1、細(xì)胞培養(yǎng)條件

RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)。

2、生長特性

細(xì)胞主要以懸浮的單細(xì)胞形式生長，部分細(xì)胞可能貼壁生長（有時可達(dá)50%）；

細(xì)胞大小不均一。

3、倍增時間

60小時(PubMed=25984343); 33.5小時(NCI-DTP); 60-70小時 (DSMZ)。

4、傳代方式

建議傳代密度為3-5×10^5個活細(xì)胞/mL；生長密度不超過2-3×10^6個活細(xì)胞/mL。

可通過補(bǔ)液、離心或更換新鮮培養(yǎng)基的形式培養(yǎng)此細(xì)胞，細(xì)胞傳代培養(yǎng)密度控制在5×10^5-2×10^6活細(xì)胞/mL為佳。換液頻率建議2-3次/周。

5、凍存和復(fù)蘇

凍存密度：推薦凍存密度1×10^6 個活細(xì)胞/mL。

凍存條件：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%血清+5%DMSO；液氮保存。

RPMI8226生長圖片

注意事項

1、嚴(yán)格控制傳代密度，密度過低或者過大都容易造成細(xì)胞死亡；

2、密度低的時候，盡量少動少離心，以減少對細(xì)胞的傷害；

3、狀態(tài)不好時可補(bǔ)加2mM谷氨酰胺；

4、在培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)細(xì)胞碎片過多的情況，可以用低速離心去除，一般為800r/min，（由于低速離心會損失部分細(xì)胞，故此操作不適合細(xì)胞密度過低時使用）；

5、凍存復(fù)蘇時保證接種密度，復(fù)蘇后維持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定，一般24h后再觀察細(xì)胞狀態(tài)。

溫馨提醒：

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