細胞學堂 | 如何將H9c2(2-1)養(yǎng)得更好？

H9c2（2-1）（大鼠心肌細胞）是由胚胎BD1X大鼠心臟組織衍生的原始克隆細胞系的亞克隆，并表現(xiàn)出骨骼肌的許多特性。該細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細胞融合會發(fā)生得很快。該細胞系是檢測細胞發(fā)育的有效模型系統(tǒng)^[1]。

本期為大家總結(jié)了，在培養(yǎng)H9c2（2-1）細胞過程中，特別需要注意的地方。

細胞復(fù)蘇

溶解細胞過程要迅速；已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。

細胞凍存

推薦配比：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO的凍存液；

細胞凍存時，盡量吹散細胞，注意控制吹打力度。

細胞培養(yǎng)

H9c2（2-1）細胞為貼壁細胞，正常細胞形態(tài)為梭形。 

圖1. H9c2（2-1）細胞正常形態(tài)

培養(yǎng)條件

?培養(yǎng)基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S

?推薦傳代比例：1:2-1:4

?推薦換液頻率：2~3次/周

?培養(yǎng)箱：37℃，5% CO2

傳代操作

?去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進行沖洗，并去上清;

?加入0.25%胰酶進行潤洗，并去上清;

?放入CO2培養(yǎng)箱消化2-4min;

?加入完全培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻。

常見問題及解答

為什么會出現(xiàn)細胞表面顆粒較多的現(xiàn)象？

可能是培養(yǎng)環(huán)境有問題，可以改用DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳三代后會恢復(fù)平整細胞表面。

為什么會出現(xiàn)空泡？

可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細胞就開始狀態(tài)變差、空泡增多。也可能是血清差，需要更換優(yōu)質(zhì)血清，及時換液。

為什么細胞長得慢？

可能是細胞接種得太少，細胞密度太低?？梢韵扰囵B(yǎng)，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)。

為什么細胞狀態(tài)變差，容易漂？

可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開；也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代，并不是細胞長滿才傳代，當有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應(yīng)該就要傳代了。

注意

?在培養(yǎng)過程中，保持細胞匯合度30％～90％；

?每一步操作都要輕柔小心，以免細胞受損；

?選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，減少有害物質(zhì)對細胞的刺激。

參考文獻

[1] Kimes BW,Brandt BL.Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.Exp Cell Res.1976 Mar 15;98(2):367-81.

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