細(xì)胞學(xué)堂 | THP-1如何誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞？

THP-1（人單核細(xì)胞白血?。﹣碜砸晃患毙詥魏思?xì)胞白血病患者的血液，在實驗研究中，常常誘導(dǎo)其分化為巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞。

本期普諾賽為大家總結(jié)了分化類型及其具體實驗操作。

THP-1分化為巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞是重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，在固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。同時，它也是高度異質(zhì)性的細(xì)胞，受局部微環(huán)境的影響，可活化為不同的類型，展現(xiàn)出不同的表型和功能。由于巨噬細(xì)胞在不同的組織環(huán)境和生理、病理條件下的異質(zhì)性，巨噬細(xì)胞被分為兩種主要類型：M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞[1]。

THP-1細(xì)胞通常用佛波酯（PMA）誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，然后在PMA仍然存在的情況下：

脂多糖(LPS)(100ng/mL)、IFN-γ(20ng/mL)培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M1極化；

IL-4(20ng/mL)、IL-13(20ng/mL)培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M2極化；

最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，可保持72h[2]。

圖1. 巨噬細(xì)胞分化為M1和M2

PMA誘導(dǎo)THP-1步驟：

將處于對數(shù)生長期的THP-1細(xì)胞離心，用RPMI-1640培養(yǎng)基重懸；

加入PMA，顯微鏡下細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整THP-1細(xì)胞密度為5*10^5/mL；

使PMA終濃度為100ng/mL，將細(xì)胞種入六孔板，每孔加入細(xì)胞2mL；

48h后，顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞構(gòu)建成功。

單核細(xì)胞THP-1用PMA誘導(dǎo)后，由懸浮式生長變成貼壁生長，由圓形變成不規(guī)則形態(tài)，體積進(jìn)一步增大，細(xì)胞漿疏松，細(xì)胞核增大明顯，可見大量明顯細(xì)胞器，胞膜周圍可見少量突起[3]。

圖2. THP-1經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞

THP-1分化為泡沫細(xì)胞

THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞后，可以通過攝取大量脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，這也是動脈粥樣硬化產(chǎn)生的原因。

將THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞后，可用RPMI-1640培養(yǎng)基配制氧化修飾低密度脂蛋白OX-LDL，使其終濃度為80mg/L，加入六孔板中，每孔量為2mL，干預(yù)24h。

油紅O染色步驟：

吸出各孔中培養(yǎng)基，PBS漂洗三次；

4%多聚甲醛37℃固定30min；

PBS漂洗兩次，油紅O（1mL/孔）37℃染色20-30min；

60%異丙醇漂洗5s，最好不要超過10s；

馬上用PBS漂洗2-3次。

單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞用OX-LDL誘導(dǎo)24h后, 倒置顯微鏡下觀察，巨噬細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，細(xì)胞膜突觸形成明顯，胞漿增加，疏松化，可見大量細(xì)胞器及吞噬的脂質(zhì)小滴。油紅O染色后，細(xì)胞漿內(nèi)可見大量紅染物質(zhì)[4]。

圖3. 巨噬細(xì)胞經(jīng)OX-LDL誘導(dǎo)后用油紅O染色

參考文獻(xiàn)

[1] 郭強, 陰海鵬, 李翠玲, 等. 誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化為M1和M2型巨噬細(xì)胞的鑒定[C].第九屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集. 2014.

[2] Serena T ,  Federica D M ,  Jieun K , et al. Convenience versus Biological Significance: Are PMA-Differentiated THP-1 Cells a Reliable Substitute for Blood-Derived Macrophages When Studying in Vitro Polarization?[J]. Frontiers in Pharmacology, 2018, 9:71-.

[3，4] 王庸晉, 王治平, 石變?nèi)A,等. IL-1對單核細(xì)胞向泡沫細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中ACAT-1mRNA表達(dá)的影響[J]. 長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2008, 22(6):4.

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