細胞學堂 | 培養(yǎng)K7M2-WT細胞，千萬不要錯過這些知識

K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨細胞)在Balb/c小鼠中形成腫瘤，在超過90%的接種小鼠中自發(fā)轉(zhuǎn)移到肺部。K7M2-WT細胞抗原表達：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、飾膠蛋白聚糖、絨毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、飾膠蛋白聚糖和骨調(diào)素的表達顯示K7M2-WT細胞骨家族細胞特性。

基礎信息

細胞復蘇

1、將水浴鍋預熱至37℃，準備好干凈的一次性手套，將細胞從液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速沒入水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以一分鐘內(nèi)全部溶解為宜；

2、將解凍的細胞放入裝有新鮮培養(yǎng)基的離心管中，打開蓋子前，用75%酒精擦拭凍存管外部；

3、1200rpm離心3分鐘左右，離心完畢后去掉上清；

4、取適量與細胞配套的完全培養(yǎng)基重懸細胞，并接入到無菌容器中，補充一定量培養(yǎng)基，再放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

細胞凍存

1、配置凍存液。由于DMSO配置時會發(fā)熱，一定要等凍存液冷卻后再使用，避免灼傷細胞；

2、細胞消化好后用新鮮培養(yǎng)基終止，制成細胞懸液，1200rpm離心3分鐘左右，盡量吸盡上清；

3、加入配置好的凍存液，調(diào)節(jié)濃度至大約1×106個細胞/mL，分裝到細胞凍存管；

4、分裝好的凍存液轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；

5、從-80℃冰箱取出凍存管，并迅速轉(zhuǎn)移到液氮長期保存。

細胞傳代

1、將培養(yǎng)基吸出丟棄，加入2mL PBS潤洗；

2、吸出PBS丟棄，加入2mL胰酶潤洗；

3、放入培養(yǎng)箱消化2-3分鐘，輕拍培養(yǎng)皿側(cè)壁，看到細胞脫壁且聚集的細胞團松散開后，加入2mL完全培養(yǎng)基終止消化；

4、將細胞輕柔吹打，使細胞混勻為懸浮液，根據(jù)需求進行接種。

小貼士

細胞密度不能太低；

潤洗時要注意將所有細胞都浸潤到。

圖1. K7M2-WT細胞正常生長

培養(yǎng)注意事項

1、該細胞對外界刺激較為敏感，建議使用新鮮的DMEM高糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)基出現(xiàn)發(fā)紫現(xiàn)象時不建議繼續(xù)使用，且及時更換新鮮培養(yǎng)基；

2、該細胞貼壁不牢，會有部分細胞懸浮。換液時勿用PBS進行沖洗，懸浮細胞過多時可離心收集再放回原培養(yǎng)瓶；

3、該細胞傳代時請注意消化程度，請勿消化過度。

溫馨提醒：

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