細(xì)胞學(xué)堂 | AR42J細(xì)胞難復(fù)蘇、有黑點(diǎn)怎么辦

AR42J細(xì)胞基礎(chǔ)信息

1、培養(yǎng)條件

培養(yǎng)液：Ham's F-12K(PM150910)＋20% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)

培養(yǎng)環(huán)境：37℃、 5%二氧化碳、飽和濕度培養(yǎng)

2、細(xì)胞背景

AR42J（大鼠胰腺外分泌細(xì)胞）在腎上腺皮質(zhì)激素刺激下可誘導(dǎo)出分泌活性，并伴有廣泛的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重構(gòu)。

3、生長特性

上皮細(xì)胞樣，貼壁生長，生長速度緩慢，成片生長。

AR42J細(xì)胞傳代步驟

1、吸出原培養(yǎng)液；

2、加入2mL左右PBS，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄；

3、加入1mL左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞；

4、放入培養(yǎng)箱消化，消化5分鐘左右，顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯分離變圓且自然脫落；

注：細(xì)胞一定要徹底消化下來，全程不要拍打培養(yǎng)瓶。

5、加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕、反復(fù)吹打細(xì)胞，在顯微鏡下觀察，細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液；

6、收集細(xì)胞懸液離心，1200rpm離心3-5min，離心完吸出上清丟棄；

7、加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足足量培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)；

8、檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤；

AR42J細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1、AR42J細(xì)胞凍存后有一定復(fù)蘇難度。因其生長非常慢，不易貼壁，從復(fù)蘇到正常培養(yǎng)傳代這個(gè)過程，通常需要10~14天，需要多一點(diǎn)耐心；

2、復(fù)蘇第2天可觀察漂浮的細(xì)胞，狀態(tài)是否良好。第4~5天有少量貼壁，且有密度依賴；

3、細(xì)胞增殖過程中會(huì)產(chǎn)生少許細(xì)胞碎片和黑點(diǎn)，這屬于正?，F(xiàn)象，及時(shí)換液除去即可；每2~3天換液一次；

4、傳代比例不宜過大,一般控制在1:2，每4~5天傳代一次；

5、傳代時(shí)細(xì)胞較難消化成單顆，但只要消化為小且松散的細(xì)胞團(tuán)（一般為2-5個(gè)細(xì)胞聚集）也不影響細(xì)胞生長；

6、細(xì)胞聚集成團(tuán)塊生長，不會(huì)完全匯合，團(tuán)塊過大時(shí)（接種后團(tuán)塊擴(kuò)大5~8倍，或細(xì)胞出現(xiàn)堆積）需及時(shí)傳代，否則會(huì)成團(tuán)漂?。?/p>

7、多聚賴氨酸包被有利于細(xì)胞貼壁，可使細(xì)胞分布更均勻；

圖1：AR42J細(xì)胞正常生長圖

圖2：復(fù)蘇第2天，AR42J細(xì)胞狀態(tài)圖

圖3：AR42J細(xì)胞包被，培養(yǎng)兩周狀態(tài)圖

溫馨提醒：

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