細(xì)胞學(xué)堂 | MKN-7細(xì)胞培養(yǎng)攻略

1、細(xì)胞培養(yǎng)條件

RPMI-1640 (PM150110)＋10% FBS (164210-500)＋1% P/S (PB180120)

2、生長特性

上皮樣，貼壁細(xì)胞

3、傳代方式

用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化7~10min，推薦傳代比例1: 2

凍存和復(fù)蘇 

凍存

建議凍存密度比普通細(xì)胞略高。如期望復(fù)蘇后可以鋪滿6cm的培養(yǎng)皿，則需凍存的細(xì)胞量為培養(yǎng)皿鋪滿時(shí)的1.5倍。

請(qǐng)使用優(yōu)質(zhì)凍存液。如果是自己配置的程序凍存液，可以適當(dāng)提高血清含量。推薦凍存密度1~5×10^6 cell/mL。

復(fù)蘇

建議使用T25瓶或者6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)。如果復(fù)蘇前期細(xì)胞形態(tài)多樣，可進(jìn)行暫時(shí)換液處理，待細(xì)胞鋪滿再傳代；如需擴(kuò)增，需等細(xì)胞較密集時(shí)再傳代。

MKN-7培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1、MKN-7生長速度很慢

? 倍增時(shí)間約3天左右，正常培養(yǎng)5~7天可傳代一次；

2、貼壁形態(tài)展開較大

? 消化之后一瓶細(xì)胞量比較少，傳代時(shí)的比例建議1：2，凍存時(shí)1瓶細(xì)胞只能凍一管；

3、折光度較低

? 在顯微鏡下觀察時(shí)，輪廓有時(shí)不清晰，觀察時(shí)顯微鏡亮度請(qǐng)勿太高，否則可能看不到細(xì)胞邊界；

4、較難消化

? 常規(guī)的消化方法難以把控，加入培養(yǎng)基后細(xì)胞會(huì)迅速貼壁。建議使用浸泡消化，使用胰酶完全浸潤細(xì)胞，直接放入37℃ 的環(huán)境中進(jìn)行消化，消化時(shí)間一般在7~10分鐘。

? 待部分細(xì)胞脫壁漂起后，鏡下觀察，大部分細(xì)胞有脫壁跡象后加入適量胰酶，輕輕吹打，將細(xì)胞吹落、吹散，隨后吸出器皿，加入培養(yǎng)基終止消化，離心收集。

? 若還有少量細(xì)胞無法輕輕吹下，則在吸出脫落細(xì)胞后，加入胰酶繼續(xù)消化再收集。

小貼士：使用這種消化方法，可能會(huì)造成一定的細(xì)胞損失。

圖：MKN-7生長圖片

溫馨提醒：

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