直播答疑 | 常見細胞增殖檢測方法

來源：武漢普諾賽瀏覽量：974 發(fā)布時間：2022-09-09

細胞增殖檢測實驗對于很多老師們來說并不陌生，在8月25日開播的“常見細胞增殖檢測方法”課程中，有很多老師就細胞增殖檢測提出了疑問。我們篩選出部分代表性問題，并作了詳細解答。

1、MTT貼壁細胞要預培養(yǎng)24小時以上嗎？

MTT檢測中，貼壁細胞需要根據(jù)細胞的生長速度來看細胞接種時間，細胞在對數(shù)期的時候可以進行干預刺激。

2、怎么確定EdU的孵育時間？

EdU孵育時間由細胞周期決定，一般是細胞周期的1/10-1/5，大部分細胞系可采用孵育2小時的方式，也可以參考有些EdU增殖檢測數(shù)據(jù)庫中推薦的細胞孵育時間。

3、請問不更換培養(yǎng)基加CCK-8，有沒有影響？

可以不更換培養(yǎng)基加CCK-8，不過加之前最好要觀察一下細胞的狀態(tài)以及密度。

4、原代培養(yǎng)干細胞的時候，怎么判斷細胞狀態(tài)是在增殖還是誘導成其他細胞了呢？

原代細胞培養(yǎng)中，細胞狀態(tài)的判斷，需要結(jié)合細胞的形態(tài)、細胞的生長速度、細胞純度等來判斷。判斷增殖最簡單的方法，是看細胞的數(shù)量是否增加，至于細胞是否誘導成其他細胞，這個需要通過鑒定，來判斷是否變成其他細胞，或者變成其他細胞的比例。

5、毒性或者抑制OD不都是下降的嗎？毒性下降的更明顯嗎？

具體要看檢測的方法。如果是MTT或者CCK-8等通過檢測活細胞來反映毒性的，OD值與對照組比，值下降，說明細胞活力越低，毒性越大或者抑制增殖；如果是檢測死細胞來反映毒性的，OD值越低，說明死細胞越少，毒性越小。

6、怎么檢測藥物對細胞的毒性作用還是過表達了基因的抑制作用？

7、OD值一般范圍多少比較好？

一般是在0.1-2.0之間，最好在1.0附近。

8、克隆培養(yǎng)期間需要換液嗎?

可以進行1-2次換液，注意換液前預溫培養(yǎng)基，沿壁加液。

9、3厘米的培養(yǎng)皿可以放多少培養(yǎng)基啊？

建議加3毫升左右。

10、過期一年的1640培養(yǎng)基還能用嗎？

建議不要使用，如果是基礎(chǔ)培養(yǎng)基，覺得扔掉比較可惜，可以當作PBS來使用，但要注意保持無菌。

11、室溫放置了三天的培養(yǎng)基還能用嗎？

培養(yǎng)基一般是4℃存放，放室溫3天，需要觀察下培養(yǎng)基顏色，有無渾濁、沉淀和絮狀物，如果是培養(yǎng)液中添加了一些特殊因子，需要考慮添加因子的穩(wěn)定性，如果沒有以上異常情況，可以使用。

12、胰蛋白酶冷消化組織后，都是黏液組織，離心也沒辦法，怎么把黏液組織轉(zhuǎn)移到新的管子里再進行二次消化呢？

如果是胰酶消化的時候出現(xiàn)粘液組織或者組織呈果凍狀，可能是組織中細胞損傷大，釋放的DNA膠體包裹細胞碎片。建議觀察是不是消化液的體積較少，可以用低濃度的胰酶或者消化作用更溫和的膠原酶消化，同時也可以加Dnase I。

13、人成纖維細胞很難消化，每次都不能完全消化下來，有什么辦法可以解決？

細胞難消化，與消化用的胰酶濃度、胰酶溫度、胰酶是否充分浸潤、胰酶是否含EDTA、培養(yǎng)瓶是否包被等因素有關(guān)，建議從以上方面進行調(diào)整。