細(xì)胞學(xué)堂 | 神經(jīng)元細(xì)胞漂浮問題處理大全

神經(jīng)元是具有長突觸(軸突)的細(xì)胞，它由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經(jīng)纖維，它的末端的細(xì)小分支叫做神經(jīng)末梢。

細(xì)胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中，細(xì)胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細(xì)胞突起是由細(xì)胞體延伸出來的細(xì)長部分，又可分為樹突和軸突。每個神經(jīng)元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細(xì)胞體；每個神經(jīng)元只有一個軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經(jīng)元或其他組織，如肌肉或腺體。

圖1. 大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞

神經(jīng)元細(xì)胞比較脆弱，收貨時細(xì)胞可能會漂。

今天，普諾賽就教大家如何處理收貨漂浮，并整理好了培養(yǎng)注意事項(xiàng)，讓您的實(shí)驗(yàn)順暢無阻！

收到有漂的細(xì)胞怎么辦

1、到貨后先不用開瓶，放培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時;

2、神經(jīng)元細(xì)胞由于對溫度和震動比較敏感，所以細(xì)胞收貨有漂的細(xì)胞團(tuán)屬于正?，F(xiàn)象，如果還沒準(zhǔn)備好做實(shí)驗(yàn)，可收集細(xì)胞團(tuán)放回原瓶培養(yǎng)，并盡快準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)。若原瓶為不透氣瓶蓋，一定要擰松瓶蓋培養(yǎng)，正常T25瓶留5~6mL培養(yǎng)液就好。

如何處理漂的神經(jīng)元細(xì)胞團(tuán) 

1、收集所有細(xì)胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀；

2、加入1mL左右0.125%胰酶輕柔重懸混勻細(xì)胞，不能吹打，放入4℃冰箱消化細(xì)胞，靜置3-5min；

3、消化時間到后，加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化，1200rpm 5min離心；

4、去掉上清，加入5mL完全培養(yǎng)基（可補(bǔ)加1%FBS，促進(jìn)貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)（需對培養(yǎng)容器進(jìn)行包被）；

5、接種后絕對靜置24-48h，48h后觀察，否則細(xì)胞容易聚團(tuán)。

培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1、神經(jīng)元細(xì)胞不能傳代，在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備好之前只需換液培養(yǎng)，換液的時候注意收集漂的細(xì)胞團(tuán)；

2、鋪板孔板要包被，消化用稀釋一倍的胰酶，即0.125%的胰酶（0.25%胰酶用PBS稀釋一倍），放4℃冰箱消化3~5min；

3、細(xì)胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預(yù)熱，室溫觀察時間不宜過長；

4、神經(jīng)元細(xì)胞由于貼壁疏松，正常培養(yǎng)和發(fā)貨都用多聚賴氨酸包被過，所以消化時間要延長，或者分次消化；

5、正常養(yǎng)的好的神經(jīng)元細(xì)胞可以活很久，但是慢慢會有雜細(xì)胞生長，無法避免。所以如果實(shí)驗(yàn)周期較長，建議在收貨一周內(nèi)盡快鋪板做實(shí)驗(yàn)。