細胞學(xué)堂 | 最常見的黑點污染：支原體和“黑膠蟲”

細胞污染是細胞培養(yǎng)中最常見、最棘手的問題，在發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)異常時，一定要及時排查污染并進行處理，否則會給我們的實驗造成極大的影響。

在各種污染類型中，小普發(fā)現(xiàn)最為大家困擾的污染就是“黑點”，所以本期細胞學(xué)堂將為大家介紹細胞出現(xiàn)黑點時可能的污染類型：支原體污染和“黑膠蟲”污染。

支原體污染

支原體污染幾乎可影響所有細胞生長參數(shù)、代謝及研究的任一數(shù)據(jù)，并且，支原體缺乏細胞壁，所以常規(guī)的抗生素并不能對它們起到抵抗作用，而且由于其直徑太小，濾菌器也無法過濾。

圖1. 支原體污染

支原體污染常見表現(xiàn)：

1、細胞狀態(tài)變差、生長變慢，在顯微鏡下觀察可能會有小黑點，但培養(yǎng)基一般不渾濁；

2、細胞傳代以后就出現(xiàn)細胞間黑點、細胞空泡化或者很多類似凋亡、壞死的細胞，最終細胞漂浮，完全死亡。

“黑膠蟲”污染

“黑膠蟲”及其分解復(fù)合物是一種常見的細胞污染物，與細胞共生，隨細胞傳代而傳代，通常抗生素對其無效。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，對細胞生長不利，嚴(yán)重時導(dǎo)致細胞死亡。

圖2. “黑膠蟲”污染

“黑膠蟲”污染常見表現(xiàn)：

? 培養(yǎng)液不渾濁，但在顯微鏡下觀察細胞時，細胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點”，且隨著培養(yǎng)時間的延長，“小黑點”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細胞不能將其去除；

? 細胞營養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液；

? 細胞生長緩慢，細胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能出現(xiàn)細胞形態(tài)的改變。

處理方法

若細胞狀態(tài)太差，建議最好直接丟棄，另外對培養(yǎng)箱做由里至外的清潔處理；

若細胞狀態(tài)尚可，那么在確定對細胞的基因及蛋白表達沒有影響的情況下，可以對應(yīng)使用支原體清除試劑或“黑膠蟲”清除試劑，培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰。

 產(chǎn)品推薦

使用普諾賽支原體清除試劑，3天之后即可見明顯清除效果；處理 15 天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅完全；如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理 6 天。

使用普諾賽“黑膠蟲”清除試劑，3天之后，即可見明顯清楚效果；連續(xù)使用12-14天即可將“黑膠蟲”清除，若“黑膠蟲”污染較為嚴(yán)重，可延長處理3-5天。