細(xì)胞學(xué)堂 | 注意這三點(diǎn)，讓你的4T1細(xì)胞養(yǎng)得更漂亮

4T1(小鼠乳腺癌細(xì)胞)是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株，它的高腫瘤發(fā)生率和存活率使其成為動(dòng)物水平乳腺癌研究的理想細(xì)胞模型。因此本期細(xì)胞學(xué)堂整理了4T1細(xì)胞的特性和收貨、培養(yǎng)注意事項(xiàng)，幫助大家快速上手、開展實(shí)驗(yàn)。

圖1. 4T1細(xì)胞正常生長(zhǎng)圖片

一、細(xì)胞特性

1、4T1乳腺癌是一種免疫原性低、惡性程度高的腫瘤，在乳腺原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)后，可迅速自發(fā)地轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)、肺、肝、腦和血液[1]；

2、BALB/c衍生的小鼠乳腺癌4T1，在其免疫原性，轉(zhuǎn)移特性和生長(zhǎng)特征方面非常接近人類乳腺癌[2];

3、4T1生長(zhǎng)特征與高浸潤(rùn)性人轉(zhuǎn)移性乳腺癌相似，在手術(shù)時(shí)，疾病程度與人類IV期乳腺癌相當(dāng)，并且可將免疫原性差的小鼠4T1乳腺癌確立為術(shù)后動(dòng)物模型[3]。

二、收貨注意事項(xiàng)

1、將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱靜置2-4h，觀察細(xì)胞狀態(tài)；

2、若細(xì)胞脫落較多，可將原瓶培養(yǎng)液離心收集沉淀，按照收貨指南消化處理后與原瓶細(xì)胞貼壁細(xì)胞合并并接種；

3、若細(xì)胞基本沒(méi)有脫落情況，80%左右密度可按1:3~1:4傳代，100%密度可1:5傳代。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1、該細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，細(xì)胞匯合度越高越難消化，建議分次消化。一次消化至有細(xì)胞移動(dòng)漂浮時(shí)終止，再進(jìn)行二次消化剩余的細(xì)胞，盡量消化成單顆細(xì)胞，細(xì)胞傳代第二天有少量細(xì)胞團(tuán)貼壁未展開為正?，F(xiàn)象，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)展開；

2、若在培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞變圓現(xiàn)象，有可能是細(xì)胞密度過(guò)大，無(wú)法展開的原因，可通過(guò)降低傳代密度來(lái)改善；

3、4T1細(xì)胞推薦生長(zhǎng)培養(yǎng)基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S。

參考文獻(xiàn)

[1] Pulaski BA, Clements VK, Pipeling MR, Ostrand-Rosenberg S. Immunotherapy with vaccines combining MHC class II/CD80+ tumor cells with interleukin-12 reduces established metastatic disease and stimulates immune effectors and monokine induced by interferon gamma. Cancer Immunol Immunother. 2000 Apr;49(1):34-45.

[2] Pulaski BA, Ostrand-Rosenberg S. Reduction of established spontaneous mammary carcinoma metastases following immunotherapy with major histocompatibility complex class II and B7.1 cell-based tumor vaccines. Cancer Res. 1998 Apr 1;58(7):1486-93.

[3] Pulaski BA, Terman DS, Khan S, Muller E, Ostrand-Rosenberg S. Cooperativity of Staphylococcal aureus enterotoxin B superantigen, major histocompatibility complex class II, and CD80 for immunotherapy of advanced spontaneous metastases in a clinically relevant postoperative mouse breast cancer model. Cancer Res. 2000 May 15;60(10):2710-5.