細胞學堂|MEG-01培養(yǎng)注意事項

基本信息

1、細胞名稱

MEG-01 (人成巨核細胞白血病細胞）

2、別名

Meg-01; MEG01; Meg01

3、細胞培養(yǎng)條件

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S，37℃；5% CO2

4、生長特性

半貼半懸 

5、細胞形態(tài)

淋巴母細胞樣

背景資料

MEG-01是一種巨核母細胞系，該細胞來自于一名費城染色體(Ph)陽性的慢性粒細胞性白血?。–ML）患者。1983年由Michinori Ogura, Yasuo Morishima等人從一名55歲患有慢性粒細胞性白血?。–ML）且處于CML爆發(fā)危機的男性的骨髓樣本中提取。

MEG-01細胞沒懸浮的細胞大多為圓形或者卵圓形，貼壁的細胞會伸出偽足。細胞質相對嗜堿性，并含有少量空泡，還觀察到細胞質突起。單克隆抗體的間接免疫熒光試驗顯示，MEG-01細胞表面的FVIII相關抗原呈陰性，該抗原在MEG-01細胞特別是大細胞的細胞質中呈陽性。所有細胞均呈彌漫性和細顆粒狀的酸性磷酸酶強陽性。

MEG-01不僅為研究人類巨核細胞分化和成熟提供研究模型，而且為血小板或蛋白質如FVIII相關抗原、血小板糖蛋白或血小板衍生生長因子（PDGF）等的產生和釋放提供一種有用的研究模型。

細胞特性

培養(yǎng)中始終存在一些黑點樣碎片，不需要特殊處理。大部分細胞呈不規(guī)則圓形懸浮狀態(tài)，有少量細胞呈梭形貼壁。

培養(yǎng)方法

以T25瓶為例

1、該細胞為半貼壁半懸浮細胞，其中貼壁細胞較少或到50%均為正常，可以按懸浮細胞的培養(yǎng)方式傳代，貼壁部分吹下即可（如遇吹不下來，可用0.25%胰酶適當消化）；

2、維持細胞密度在3-10×105cells/mL培養(yǎng)，初始接種密度不低于3×105cells/mL，長到10×105cells/mL左右進行傳代。建議前期計數后操作，后面可以根據經驗傳代；

3、每隔3天計數操作一次，如密度低于3×105cells/mL可更換小體積容器（如孔板）進行培養(yǎng)；

4、根據細胞密度選擇其中一種操作方法：

方法一

半換液。如密度不足8×105cells/mL則進行半換液；緩緩吸出上層一半的培養(yǎng)液，于1200 rpm（250g左右） 3min離心收集細胞，加入等體積新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，輕輕吹打3-5次，接回原瓶繼續(xù)培養(yǎng)；

方法二

1：2稀釋傳代。如密度接近10×105cells/mL左右，則將細胞等體積分裝到兩個新培養(yǎng)瓶，每瓶分別補加新鮮培養(yǎng)基到總體積5mL；

方法三

全離心換液或傳代。細胞每持續(xù)培養(yǎng)超一周可進行一次全離心換液或者傳代，不建議頻繁用離心的方式換液或傳代；離心轉速推薦1200rpm 3min。

特殊注意事項

1、該細胞增殖較慢，比較脆弱，培養(yǎng)中減少觀察挪動，維持穩(wěn)定的培養(yǎng)溫度和環(huán)境；

2、盡可能減少吹打次數，取樣計數或者傳代時輕輕吹打3-5下混勻細胞即可；

3、傳代后每天觀察細胞狀態(tài)，如果密度太大，不及時處理，細胞容易死亡，需嚴格控制培養(yǎng)密度；

4、至少每3天需要將細胞半換液或者傳代一次，一周左右全部離心換液一次。

凍存與復蘇

推薦凍存密度：

3~5×106 cells/mL ；

凍存液配比：

55% RPMI-1640 +40% FBS+5%DMSO，需使用程序凍存盒梯度降溫凍存。

生長圖片

圖1：建系文檔中的MEG-01細胞圖

圖2：ATCC培養(yǎng)圖，來源于ATCC

圖3：普諾賽培養(yǎng)圖

細胞背景資料詳細信息 

https://www.atcc.org/products/crl-2021

參考文獻：

[1] Ogura M, et al. Establishment of a novel human megakaryoblastic leukemia cell line, MEG- 01, with positive Philadelphia chromosome. Blood 66: 1384-1392, 1985. PubMed: 2998511