最全MKN-45細(xì)胞知識(shí)總結(jié)
MKN-45細(xì)胞由Hojo H建立，源于日本一位62歲低分化胃腺癌女性患者的肝轉(zhuǎn)移灶，廣泛應(yīng)用于癌癥檢測(cè)和治療的相關(guān)研究中。
本期細(xì)胞學(xué)堂為您整理了MKN-45細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)方法，幫助大家快速上手開展實(shí)驗(yàn)~
細(xì)胞形態(tài)
MKN-45細(xì)胞呈半貼壁半懸浮生長(zhǎng)，部分松散堆積，細(xì)胞排列不規(guī)則，生長(zhǎng)中的細(xì)胞邊緣也不明確。
MKN-45細(xì)胞系相差顯微圖[1]
MKN-45細(xì)胞顯微鏡圖
MKN-45細(xì)胞顯微鏡圖
MKN-45細(xì)胞顯微鏡圖，100X
超微結(jié)構(gòu)
掃描電鏡顯示MKN-45細(xì)胞相當(dāng)扁平，細(xì)胞表面有大量的微絨毛，細(xì)胞邊緣有長(zhǎng)線狀的細(xì)胞質(zhì)突起，相鄰的細(xì)胞呈橋粒連接。
MKN-45細(xì)胞掃描電鏡圖[1]
MKN-45細(xì)胞掃描電鏡圖[1]
裸鼠成瘤
裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)，即將細(xì)胞或組織通過原位或皮下移植到裸鼠體內(nèi)形成經(jīng)常潰瘍的腫瘤，觀察腫瘤的形成、發(fā)展及抗腫瘤藥物的效果。MKN-45為該實(shí)驗(yàn)的常用細(xì)胞株。
將MKN-45細(xì)胞皮下移植到裸鼠體內(nèi)后，MKN-45異種移植物顯示侵襲性生長(zhǎng)到宿主動(dòng)物的皮下肌肉。
無(wú)胸腺裸鼠皮下MKN-45腫瘤[1]
培養(yǎng)方法
MKN-4細(xì)胞為半貼壁半懸浮細(xì)胞，需分懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞兩部分處理。
懸浮細(xì)胞部分
直接收集培養(yǎng)基至離心管中1200rpm/min離心3min。
貼壁細(xì)胞部分
按照貼壁細(xì)胞的方式消化處理：
1、加入2mL左右PBS，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞，吸出PBS（含有少量懸浮細(xì)胞，可轉(zhuǎn)移至收集了懸浮細(xì)胞的離心管中離心）；
2、加入1mL左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞；
3、放入培養(yǎng)箱消化，消化3-5min，顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化（消化時(shí)間主要看消化狀態(tài)，如果沒有變圓，側(cè)立時(shí)不能滑落時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)30-60s），全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
4、加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液；
5、收集細(xì)胞懸液，1200rpm/min離心3分鐘，離心后吸出上清丟棄。
技巧與注意事項(xiàng)
1、由于細(xì)胞半貼壁半懸浮細(xì)胞，所以在消化傳代的時(shí)候需要注意收集漂浮的細(xì)胞，否則會(huì)造成細(xì)胞丟失；
2、如遇懸浮部分大塊聚團(tuán)，則需要將懸浮部分收集到離心管離心后，加入胰酶進(jìn)行消化處理，避免細(xì)胞團(tuán)塊增多影響生長(zhǎng)。
具體操作步驟如下：
1、將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心（1200rpm 3min）后收集細(xì)胞；
2、去掉上清，用PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中；
3、離心后去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸混勻細(xì)胞，振動(dòng)離心管混勻即可，不能吹打，放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞（2~3分鐘，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間）；
4、消化一段時(shí)間后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散；
5、加入5mL含血清的培養(yǎng)基混勻后終止消化，離心（1200rpm 3min）。
6、收集細(xì)胞沉淀，與貼壁消化下來(lái)的部分細(xì)胞混合后分瓶接種。
參考文獻(xiàn)
[1] M. Sekiguchi, T. Suzuki.11 - Gastric Tumor Cell Lines.
https://doi.org/10.1016/B978-0-12-333530-2.50014-9.
