細(xì)胞學(xué)堂 | 如何判斷細(xì)胞狀態(tài)

來(lái)源：武漢普諾賽瀏覽量：2019 發(fā)布時(shí)間：2023-09-28

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，由于培養(yǎng)的環(huán)境各不相同，同時(shí)細(xì)胞各階段的形態(tài)也存在一定差異，沒(méi)有一個(gè)確定的參照物去比對(duì)，很多老師同學(xué)也無(wú)法確定自己所養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)是否正常。

那么如何判斷細(xì)胞狀態(tài)是正常還是異常呢？本期細(xì)胞學(xué)堂將詳介紹幾種常用的判斷方法，學(xué)會(huì)這幾招，輕松辨別細(xì)胞狀態(tài)！

一、如何判斷細(xì)胞活率

• 臺(tái)盼藍(lán)染色法

臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性，可以檢測(cè)出細(xì)胞是否存活。正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。

通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡?；罴?xì)胞不著色，而死細(xì)胞會(huì)被染成藍(lán)色。

(無(wú)色為活細(xì)胞，藍(lán)色為死細(xì)胞)

染色時(shí)間不能太長(zhǎng)，3分鐘內(nèi)觀察，超時(shí)后活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色，使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。

• 顯微鏡觀察法

在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)：

懸浮細(xì)胞

活細(xì)胞透亮有光澤，死細(xì)胞暗淡無(wú)光且膜碎裂；

貼壁細(xì)胞

活細(xì)胞可貼壁且膜完整，死細(xì)胞不能貼壁。

（紅色圈為死細(xì)胞；綠色圈為活細(xì)胞；箭頭為血清雜質(zhì)）

細(xì)胞膜作為判斷細(xì)胞活性的標(biāo)準(zhǔn)之一，有的老師用“邊界清晰”來(lái)界定，認(rèn)為邊界不清晰則是細(xì)胞狀態(tài)變差，實(shí)際情況我們也有發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞膜邊緣很薄再加上顯微鏡不清晰導(dǎo)致誤判，所以小普認(rèn)為膜邊界是否清晰并不是金標(biāo)準(zhǔn)，我們更傾向于以細(xì)胞膜完整性作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，“膜完整”則為活細(xì)胞。

（該細(xì)胞膜邊緣薄透，若為黃光顯微鏡可能看不清）

二、如何判斷細(xì)胞形態(tài)異常

• 你的細(xì)胞應(yīng)該長(zhǎng)成什么樣?

在懷疑細(xì)胞形態(tài)改變之前，我們首先得知道一個(gè)正常的細(xì)胞應(yīng)該是什么樣的，誠(chéng)如每顆多肉都會(huì)有其獨(dú)特的色彩和習(xí)性，細(xì)胞也有其獨(dú)特的習(xí)性，包括生長(zhǎng)速度、形態(tài)、培養(yǎng)環(huán)境等；

除了通過(guò)我們普諾賽的官方網(wǎng)站（http://www.qzpnvc.cn/）查詢細(xì)胞信息，我們還可以通過(guò)以下幾種渠道去了解我們的細(xì)胞信息：

國(guó)際知名的細(xì)胞資源信息查詢網(wǎng)站：

瑞士生物信息研究所：https://www.cellosaurus.org/

ATCC官網(wǎng)： https://www.atcc.org/cell-products#t=productTab&numberOfResults=24

日本JCRB細(xì)胞保藏中心：https://cellbank.nibiohn.go.jp/english

中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)：https://www.cellbank.org.cn/

• 從哪幾個(gè)方面判定細(xì)胞形態(tài)異常？

細(xì)胞的微環(huán)境會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變，例如血清直接影響細(xì)胞的形態(tài)：

HK-2細(xì)胞顯微圖（無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)）

HK-2細(xì)胞顯微圖（MEM +10%FBS培養(yǎng)）

是否所有的形態(tài)改變都可以被定義為異常呢？答案是否定的。從上述例子中可以看出，兩種培養(yǎng)環(huán)境下細(xì)胞形態(tài)不同，但狀態(tài)都并無(wú)異常，因此我們需要視不同情況、綜合細(xì)胞增長(zhǎng)速度進(jìn)行評(píng)判：

未更換培養(yǎng)體系時(shí)

在培養(yǎng)體系沒(méi)有更換的前提下，細(xì)胞碎裂增多，黑點(diǎn)增多、形態(tài)改變、生長(zhǎng)速度變慢，則應(yīng)考慮外源刺激物導(dǎo)致，可能已被污染，需排查污染源，并做針對(duì)性的預(yù)防措施。

更換了培養(yǎng)體系時(shí)

(1) 如果是因?yàn)楦鼡Q了培養(yǎng)體系后導(dǎo)致的細(xì)胞形態(tài)改變，在細(xì)胞生長(zhǎng)速度正常的情況下，可正常培養(yǎng)；

(2) 如果細(xì)胞更換培養(yǎng)條件后，嚴(yán)重變形甚至貼壁減少且不能正常傳代，必須進(jìn)行干預(yù)，可通過(guò)包被培養(yǎng)瓶促進(jìn)貼壁、增加血清濃度、與原培養(yǎng)基混合使用讓細(xì)胞過(guò)渡適應(yīng)等方式進(jìn)行改善；

(3) 如果細(xì)胞對(duì)于新環(huán)境反應(yīng)激烈，直接死亡，則需更換培養(yǎng)體系；

三、如何判斷細(xì)胞污染

• 細(xì)菌污染

有以下特征之一，應(yīng)考慮細(xì)菌污染：

(1) 顯微鏡高倍鏡下可觀察到直徑比細(xì)胞小的高度重復(fù)顆粒；

(2) 細(xì)菌顆粒會(huì)持續(xù)快速增多；

(3) 培養(yǎng)基迅速變黃或者渾濁；