A-498細(xì)胞知識(shí)盤點(diǎn)

A-498（人腎癌細(xì)胞）細(xì)胞由Aaronson·S建立，是從一名52歲女性腎癌患者的腎組織中分離出的具有上皮形態(tài)的細(xì)胞系。該細(xì)胞系是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主，在腫瘤研究中具有一定的應(yīng)用價(jià)值，常作為腎細(xì)胞癌研究的模型。

本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了A-498細(xì)胞的培養(yǎng)條件與傳代、凍存步驟及常見(jiàn)應(yīng)用，幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞形態(tài)

A498細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈上皮樣形態(tài)，細(xì)胞鋪開(kāi)面積大，單位面積細(xì)胞總數(shù)量少，少量細(xì)胞有觸角；

低密度時(shí)可觀察到單個(gè)細(xì)胞清晰的邊緣，密度大于100%時(shí)邊緣不清晰，細(xì)胞與細(xì)胞之間沒(méi)有間隙；

A-498細(xì)胞顯微鏡圖

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)條件

MEM＋10% FBS＋1% P/S；

氣相：空氣，95%；二氧化碳：5%；

溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%；

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)，上皮細(xì)胞樣；

倍增時(shí)間

33-36h；

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮培養(yǎng)條件

1、A-498細(xì)胞的傳代

（1）細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

（2）棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次；

（3）加1mL胰酶（含0.25% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓、分離并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化；

（4）按3-4mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4min，棄去上清液，補(bǔ)加2-3mL培養(yǎng)液后吹勻；

（5）收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的已添加好新鮮培養(yǎng)基的皿中或者瓶中，傳代后每個(gè)T25培養(yǎng)液總體積是5-6mL，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。

注意事項(xiàng) 

A-498細(xì)胞鋪開(kāi)面積大，單位面積細(xì)胞總數(shù)量少，需要合理控制傳代密度，建議細(xì)胞密度80%時(shí)，1:2-1:4傳代，2-3天換液或傳代一次；

2、A-498細(xì)胞的凍存

有血清程序凍存（需梯度降溫）：

（1）配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；

（2）制備好的細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，計(jì)算總細(xì)胞量；

（3）細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉(zhuǎn)速1200rpm（250g）3min；

（4）加入配置好的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL；

（5）分裝入凍存管，一個(gè)凍存管分裝1~1.5mL；

（6）推薦使用程序降溫盒，分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放入-80℃冰箱過(guò)夜；

（7）從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉(zhuǎn)移到液氮長(zhǎng)期保存。

常見(jiàn)應(yīng)用

 A498細(xì)胞常作為腎細(xì)胞癌研究的模型：

（1）通過(guò)轉(zhuǎn)染調(diào)節(jié)特定信號(hào)通路，研究其對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲的影響；

（2）研究藥物對(duì)腎癌細(xì)胞進(jìn)展的抑制作用，篩選腫瘤藥物；

（3）通過(guò)A498在動(dòng)物體內(nèi)造模，模擬腎細(xì)胞癌細(xì)胞在體內(nèi)行為，研究腎細(xì)胞癌生物學(xué)特性等。

參考文獻(xiàn)

[1]張悅,于學(xué)煒等.黃芪甲苷調(diào)節(jié) miR－21 基因抑制腎癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2020,28(18):3145-3149

[2]Yan Sun,Liang Zhu,et al.ZDHHC2-Mediated AGK Palmitoylation Activates AKT–mTOR Signaling to Reduce Sunitinib Sensitivity in Renal Cell Carcinoma. Cancer Res (2023) 83 (12): 2034–2051.https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-22-3105