Annexin V實(shí)驗(yàn)對(duì)照設(shè)置
Annexin V是常用的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法，一般通過(guò)流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，方便后續(xù)數(shù)據(jù)分析，通常需要設(shè)置不同對(duì)照實(shí)驗(yàn)組。
①樣本不帶自發(fā)熒光
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組別 |
Annexin V |
核染料 |
樣本類型 |
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空白對(duì)照 |
- |
- |
不做任何處理的細(xì)胞 |
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生物學(xué)對(duì)照 |
+ |
+ |
不做任何處理的細(xì)胞 |
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單陽(yáng)對(duì)照1 |
+ |
- |
有明顯凋亡的細(xì)胞 |
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單陽(yáng)對(duì)照2 |
- |
+ |
有明顯凋亡的細(xì)胞 |
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實(shí)驗(yàn)組 |
+ |
+ |
實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞 |
②樣本帶自發(fā)熒光
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組別 |
Annexin V |
核染料 |
樣本類型 |
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空白對(duì)照 |
- |
- |
不做任何處理無(wú)自發(fā)熒光的細(xì)胞 |
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生物學(xué)對(duì)照 |
+ |
+ |
不做任何處理的細(xì)胞 |
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單陽(yáng)對(duì)照1 |
+ |
- |
無(wú)自發(fā)熒光有明顯凋亡的細(xì)胞 |
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單陽(yáng)對(duì)照2 |
- |
+ |
無(wú)自發(fā)熒光有明顯凋亡的細(xì)胞 |
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單陽(yáng)對(duì)照3 |
- |
- |
帶自發(fā)熒光的細(xì)胞 |
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實(shí)驗(yàn)組 |
+ |
+ |
實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞 |
空白對(duì)照：調(diào)節(jié)閾值和儀器電壓。
生物學(xué)對(duì)照：排除實(shí)驗(yàn)操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，扣除熒光背景，同時(shí)還可以作為實(shí)驗(yàn)組劃門的依據(jù)。
單陽(yáng)對(duì)照：調(diào)節(jié)補(bǔ)償，同時(shí)也可以輔助調(diào)節(jié)該通道的電壓，防止信號(hào)超出儀器接受范圍。
注意事項(xiàng)：
*單陽(yáng)對(duì)照組細(xì)胞一定要用明顯有凋亡的細(xì)胞，因?yàn)檎{(diào)節(jié)補(bǔ)償需要有足夠的陽(yáng)性信號(hào)
*樣本帶自發(fā)熒光需要設(shè)置三管單陽(yáng)對(duì)照，確保每一管都只有一種熒光
實(shí)驗(yàn)組：檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
Tips：
樣本為貼壁細(xì)胞：
*細(xì)胞培養(yǎng)基中漂浮的細(xì)胞需要收集，與后續(xù)收集的貼壁細(xì)胞一起檢測(cè)
*避免人為操作帶來(lái)的細(xì)胞損傷，如：胰酶消化時(shí)間要適宜，消化貼壁細(xì)胞時(shí)操作要輕柔等
*盡量不使用含EDTA的胰酶，因?yàn)镋DTA會(huì)影響Annexin V與PS的結(jié)合。如果一定要用含EDTA的胰酶，終止消化后要將細(xì)胞洗滌干凈，盡量去除EDTA
*細(xì)胞比較難消化時(shí)可以分批次進(jìn)行消化，避免先消化下來(lái)的細(xì)胞被過(guò)度消化導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果
